PCR實(shí)驗室,也叫臨床基因擴增實(shí)驗室,是專(zhuān)門(mén)用于檢測艾滋病、乙型肝炎、禽類(lèi)和其他感染性疾病的實(shí)驗室。整理了 PCR實(shí)驗室的施工規范,并附上 PCR實(shí)驗室儀器設備清單,供大家參考~
用 PCR方法擴增包含在病毒體內的基因,可以檢測感染者體內是否含有某種病毒。該法具有靈敏、特異、快速、對樣品要求低等優(yōu)點(diǎn),因而受到廣泛的重視。PCR實(shí)驗已廣泛應用于臨床診斷,各防疫檢測部門(mén)對禽類(lèi)疾病的診斷。
但這類(lèi)實(shí)驗需要有安全的環(huán)境、合理配置的實(shí)驗室、規范的操作。近幾年, PCR實(shí)驗室的建設越來(lái)越規范和重視。
本論文從基因擴增檢測實(shí)驗室的平面布置、空調通風(fēng)系統設計、氣流控制、污染防治等幾個(gè)方面闡述了實(shí)驗室設計中的主要特點(diǎn),并附上了 PCR實(shí)驗室常用設備清單。
一、 PCR實(shí)驗室平面布置
臨床基因擴增檢測實(shí)驗室原則上分為四個(gè)獨立的工作區:試劑準備區、制樣區、擴增反應混合物配制和擴增區、產(chǎn)物分析區。為了避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區域必須嚴格沿一個(gè)單一的方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存與準備區→標本制備→擴增反應混合物配制和擴增反應區→產(chǎn)物分析區。
在實(shí)驗區域間,應采用傳送窗將試劑和樣品傳送。
二 PCR實(shí)驗室的空調通風(fēng)系統與壓力控制
PCR實(shí)驗室沒(méi)有嚴格的凈化要求,但為了避免各試驗區間可能出現交叉污染,建議采用全送全排氣流組織。與此同時(shí),應嚴格控制送、排風(fēng)量,保證各試驗區的壓力要求。
1、 PCR實(shí)驗室試劑儲藏及準備區
試驗區主要進(jìn)行的操作是:貯存試劑的準備、試劑的分裝、主反應混合液的制備。
對于氣流壓力的控制,本區并無(wú)嚴格要求。
2、 PCR實(shí)驗室的標本制備區域
在這一地區主要進(jìn)行的操作包括臨床標本的保存、核酸(RNA、 DNA)的提取、儲存以及添加到擴增反應管中 cDNA的合成。
3、 PCR實(shí)驗室擴增反應混合物的配制及擴展區
本區操作以 DNA或 cDNA擴增為主。
4、 PCR實(shí)驗室擴增產(chǎn)物分析區
在這一地區主要進(jìn)行的是擴增片段的測定。如果用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測,這個(gè)區域可以不設。
三、 PCR實(shí)驗室污染防治措施
PCR實(shí)驗室設計的核心是如何防止污染。實(shí)踐中,污染主要表現為:擴增產(chǎn)物的污染、天然基因組 DNA的污染、試劑污染和標本間的污染。因為當污染發(fā)生時(shí),實(shí)驗必須停止,直到找到污染源為止,并且結果必須無(wú)效,需要重新進(jìn)行實(shí)驗。因此出現污染后再?lài)@實(shí)驗室尋找污染源不僅費時(shí)又麻煩,浪費人力物力。所以要避免污染,首先應該是預防,而非排除。
1.嚴格劃分工作區域
2.系統的合理設置
3.標準操作
4、嚴苛管理
5、實(shí)驗室配套齊全